Цель: На примере рипасудила проанализировать эффект ингибиторов ROCK на клетки эндотелия роговицы пациентов с ДФ и здоровых людей, используя культуры тканей ex vivo и клеточные модели in vitro.
Дизайн: Экспериментальное исследование: лабораторный эксперимент.
Методы: В рамках данного институционального исследования использовались состоящие из эндотелиальных клеток Десцеметовой мембраны пластинки, полученные от пациентов с ДФ (n = 450), перенесших эндотелиальную кератопластику Десцеметовой мембраны (ДФ модель ex vivo), нормальные донорские роговицы (n = 30), каждой из которой проводилась скарификация центральной зоны эндотелия (модель заживления раны ex vivo), нормальные донорские роговицы (n = 20) без повреждений эндотелия и бессмертные клеточные линии (n = 3), полученные от пациентов с ДФ (ДФ модель in vitro). Пластинки десцеметовой мембраны разрезались на половинки и инкубировались в течение 24-72 часа с или без однократной дозы рипасудила в 30 мкМ. Анализировались эффекты рипасудила на экспрессию генов и белков, отвечающих за пролиферацию, миграцию, функциональность и эндотелиально-мезенхимальные взаимодействия, результаты дополнялись функциональным анализом клеточных линий ДФ.
Результаты: Единственная доза рипасудила приводит к значительной активации генов и белков, ответственных за прогрессирование клеточного цикла, матричную адгезию и миграцию, эффект длится до 72 часов, при этом в обеих группах ex vivo классические маркеры эндотелиально-мезенхимального взаимодействия подавлялись в сравнении с теми же показателями в контрольной группе. Стимуляция пролиферации и миграции, рипасудил-ассоциированные изменения в сигнатурах функциональных генов были подтверждены in vitro на клеточных линиях ДФ.
Выводы: Полученные данные подтверждают, что ингибирование Rho-ассоциированной протеинкиназы является потенциальным инструментом регенеративной терапии при ДФ благодаря реактивации клеточной пролиферации и миграции наряду с восстановлением насосной и барьерной функции эндотелия без нежелательных изменений фенотипа.